วิธีการแช่แข็ง - แห้งเชื้อแบคทีเรีย (Lyophilization)

การอบแห้งแบบแช่เย็นหรือแช่แข็งเป็นขั้นตอนในห้องปฏิบัติการสั้น ๆ

การแช่เย็นหรือที่เรียกว่าการ ทำให้เป็น น้ำแข็งหรือ cryodesiccation เป็นกระบวนการของการขจัดน้ำจากผลิตภัณฑ์หลังจากแช่แข็ง (แล้ววางไว้ใต้สูญญากาศ) ทำให้น้ำแข็งสามารถเปลี่ยนจากของแข็งไปเป็นไอได้โดยไม่ต้องผ่านของเหลว น้ำแข็ง (หรือตัวทำละลายแช่แข็งอื่น ๆ ) จะถูกลบออกจากผลิตภัณฑ์ผ่านกระบวนการระเหิดและโมเลกุลของน้ำที่ถูกผูกไว้จะถูกกำจัดออกจากกระบวนการ desorption

พื้นฐานของการทำ Lyophilization

หนึ่งในวิธีที่ดีที่สุดในการเก็บเชื้อแบคทีเรียเชื้อรายีสต์หรือจุลินทรีย์อื่น ๆ เป็นระยะเวลานานคือการใช้กระบวนการแช่แข็ง ขั้นตอนการตรวจทางห้องปฏิบัติการแบบสั้นนี้สามารถใช้กับเครื่องแช่แข็งที่มีจำหน่ายในท้องตลาดซึ่งจะช่วยรักษาวัฒนธรรมของคุณไว้ เนื่องจากการทำให้แห้งด้วยความเย็นเป็นรูปแบบการอบแห้งที่ซับซ้อนและมีราคาแพงที่สุดกระบวนการนี้มักถูก จำกัด ไว้สำหรับวัสดุที่ละเอียดอ่อนและอ่อนไหวต่อความร้อนที่มีมูลค่าสูง สารที่ไม่ได้รับความเสียหายจากการแช่แข็งจะสามารถทำให้แห้งได้เพื่อไม่ให้เก็บรักษาในตู้เย็น

ขั้นตอนนี้อาจใช้เวลาเพียงสามชั่วโมงและตราบเท่าที่ 24 ชั่วโมงโดยไม่รวมถึงระยะเวลาการเติบโตของวัฒนธรรม

ขั้นตอนการทำ Lyophilization แบบทีละขั้นตอน

1. ก่อนอื่นให้ปลูกวัฒนธรรมค้างคืนหรือสนามหญ้าของจุลินทรีย์บนอาหารเลี้ยงเชื้อ LB หรือจานอาหารที่เหมาะสมอื่น ๆ

2. จากนั้นเตรียมฝาครอบฝาปิดที่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยการต้มน้าก่อนเวลาด้วยฝาปิด (ที่รองยาง) วางอยู่ด้านบน วางฉลากกระดาษที่พิมพ์ด้วยรหัสประจำตัวของวัฒนธรรมภายในหลอดก่อนที่จะมีการแช่เย็น หรือใช้ หลอดที่มีฝาปิดที่ออกแบบมาเพื่อความปลอดเชื้อ

1. เพิ่มบัฟเฟอร์การทำให้เป็นเนื้อเยื่อแช่แข็ง 4 มิลลิลิตรลงในจาน หากจำเป็นให้เซลล์สามารถแขวนลอยโดยใช้แกนแก้วที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว

2. เคลื่อนย้ายสารแขวนลอยไปยังขวดที่ผ่านการฆ่าเชื้ออย่างรวดเร็ว เพิ่มประมาณ 1.5 มล. ต่อขวด ซีลที่มีฝาปิดยาง

3. ระงับการระงับการเพาะเลี้ยงภายในขวดด้วยการวางขวดใน -20 องศาเซลเซียสแช่แข็ง

1. เมื่อวัฒนธรรมถูกแช่แข็งแล้วให้เตรียมเครื่องแช่แข็งโดยการเปิดเครื่องและปล่อยให้มีเวลาสำหรับอุณหภูมิที่เหมาะสมและสภาวะสูญญากาศให้คงที่ ทำตามคำแนะนำของผู้ผลิตสำหรับแบรนด์เครื่องแช่แข็งที่คุณกำลังใช้อยู่

2. อย่างระมัดระวังและไม่ติดเชื้อให้วางฝาขวดนมไว้ที่ด้านบนของขวดเพื่อให้ความชื้นสามารถหลบหนีได้ในระหว่างกระบวนการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและใส่ขวดเข้าไปในห้องแช่แข็งเครื่องอบแห้ง ใช้สูญญากาศเข้ากับห้องตามคำแนะนำของผู้ผลิต

3. ปล่อยให้เวลาในการเพาะเลี้ยงให้แห้งสนิท (แห้ง) ขั้นตอนนี้อาจใช้เวลาสองถึงสามชั่วโมงถึงข้ามคืนขึ้นอยู่กับปริมาณของแต่ละตัวอย่างและจำนวนตัวอย่างที่คุณมี

4. นำตัวอย่างออกจากห้องแช่แข็ง - เครื่องเป่าตามคำแนะนำของผู้ผลิตและปิดผนึกขวดด้วยฝายางทันที

5. จัดเก็บอาหารที่แช่เย็นไว้ที่อุณหภูมิห้อง

ผลิตภัณฑ์ที่คุณต้องการ

• แช่แข็งเครื่องเป่า
• สารอาหารหรืออื่น ๆ ที่เหมาะสมจานวุ้น (และบ่มเพาะที่จะเติบโตทางวัฒนธรรม)
• ก้านแก้ว
• บัฟเฟอร์การทำ Lyophilization
• ฝาปิดด้านบนเป็นขวดที่มีตัวยึดยาง (และฝาปิดเพื่อใช้ฝาปิด)
• ตู้แช่แข็ง

<sub>อ้างอิง:

SP วิทยาศาสตร์ หลักการพื้นฐานของการอบแห้งแบบแช่เยือกแข็ง http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>