วิธีการทำบัฟเฟอร์ย้อมสี Immunohistochemical Staining Buffer
น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) เป็นสารละลายบัฟเฟอร์ที่นิยมใช้ในการย้อมสีด้วยวิธี immunohistochemical (IHC) และมักใช้ในการวิจัยทางชีววิทยา PBS เป็นสารละลายเกลือน้ำที่มีโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟตโซเดียมคลอไรด์และในบางกรณีโพแทสเซียมคลอไรด์และโพแทสเซียม dihydrogen phosphate
การย้อมสี Immunohistochemical
Immunohistochemistry หมายถึงกระบวนการตรวจหาแอนติเจนเช่นโปรตีนในเซลล์ของเนื้อเยื่อโดยใช้หลักการของแอนติบอดีที่มีผลผูกพันเฉพาะกับแอนติเจนในเนื้อเยื่อชีวภาพ
การย้อมสี Immunofluorescent เป็นวิธีการย้อมสี immunohistochemical ครั้งแรก
แอนติเจนจะปรากฏให้เห็นเมื่อผสานกับแอนติบอดีที่ใช้ย้อมสีเรืองแสงเนื่องจากปฏิกิริยาแอนติเจน - แอนติบอดีขั้นตอนนี้เกิดขึ้นเมื่อมันถูกกระตุ้นด้วยแสงที่น่าตื่นเต้นของความยาวคลื่นที่เฉพาะเจาะจงภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
ความเข้มข้นของไอออนบวกและไอออนของสารละลายจะตรงกับความต้องการของร่างกายมนุษย์นั่นคือ isotonic
สูตรสำหรับ PBS
คุณสามารถเตรียม PBS ได้หลายวิธี มีหลายสูตร บางคนไม่มีโพแทสเซียมในขณะที่คนอื่น ๆ มีแคลเซียมหรือ แมกนีเซียม
สูตรนี้ค่อนข้างง่าย สำหรับโซลูชั่นสต๊อกหุ้น 10X PBS (0.1M) อย่างไรก็ตามคุณสามารถสร้างโซลูชันสต็อค 1X หรือเริ่มต้นด้วยสูตร 10X นี้และเจือจางไปที่ 1X
กระบวนการทั้งหมดใช้เวลาประมาณ 10 นาที
นอกจากนี้ยังมีตัวเลือกในการเพิ่ม Tween
สิ่งที่คุณต้องทำบัฟเฟอร์ PBS
- โซเดียมฟอสเฟต monobasic (ไม่มีน้ำ)
- โซเดียมฟอสเฟต dibasic (ไม่มีน้ำ)
- เกลือแกง
- ชั่งและชั่งน้ำหนักเรือ
- ขดลวดแม่เหล็กและบาร์กวน
- หัววัด pH ที่ปรับเทียบและเหมาะสมสำหรับปรับ pH
- ขวดปริมาตร 1 ลิตร
- Tween 20 (ตัวเลือก)
วิธีการทำฟอสเฟตบัฟเฟอร์เกลือ (PBS)
ชั่ง 10.9g ปราศจากโซเดียมฟอสเฟต dibasic (Na2HPO4), 3.2g ซัลเฟตโซเดียมฟอสเฟตเดี่ยว (NaH2PO4) และโซเดียมคลอไรด์ 90 กรัม (NaCl)
ละลายในน้ำกลั่นประมาณ 1 ลิตร
ปรับ pH ให้อยู่ที่ 7.4 และทำให้สารละลายนี้มีปริมาตรสุดท้าย 1 ลิตร
เจือจาง 10X ก่อนใช้และปรับ pH ใหม่หากจำเป็น
คุณสามารถทำสารละลาย PBS ที่มี Tween 20 0.5 เปอร์เซ็นต์โดยการเพิ่ม 5mL Tween 20 ลงในสารละลาย 1L
เคล็ดลับในการทำบัฟเฟอร์ PBS
เก็บบัฟเฟอร์ไว้ที่อุณหภูมิห้องหลังจากที่คุณได้ทำสารละลาย PBS แล้ว
น้ำยาปราศจากน้ำสามารถใช้แทนได้ แต่คุณจะต้องคำนวณมวลที่เหมาะสมเพื่อรองรับโมเลกุลของน้ำเพิ่ม
การใช้ฟอสเฟตบัฟเฟอร์เค็ม (PBS)
น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟตมีประโยชน์หลายอย่างเนื่องจากมีความเป็นพิษและไม่เป็นพิษต่อเซลล์มากที่สุด มันสามารถใช้ในการเจือจางสารและมักใช้ในการล้างภาชนะบรรจุของเซลล์ พีบีเอสสามารถใช้เป็นตัวเจือจางในวิธีการต่างๆในการทำให้สารชีวโมเลกุลแห้งได้เนื่องจากโมเลกุลของน้ำภายในโครงสร้างนั้นจะมีโครงสร้างอยู่รอบ ๆ สารโปรตีนตัวอย่างเช่น มันจะ "แห้ง" และตรึงไว้กับพื้นผิวที่มั่นคง
ค่า pH จะคงที่และสม่ำเสมอเพื่อป้องกันการทำลายเซลล์
ฟิล์มบาง ๆ ของน้ำที่ยึดติดกับสารช่วยป้องกันการผุพองหรือการเปลี่ยนแปลงตามรูปแบบอื่น ๆ บัฟเฟอร์คาร์บอเนตสามารถใช้เพื่อวัตถุประสงค์เดียวกัน แต่มีประสิทธิภาพน้อยกว่า
นอกจากนี้ PBS ยังสามารถใช้สเปกตรัมอ้างอิงในการวัดการดูดซับ โปรตีน ใน ellipsometry