บัฟเฟอร์เหล่านี้สามารถใช้สำหรับการใช้งานทางชีววิทยาได้ใกล้กับ pH ที่เป็นกลาง
ค่าพีคอาร์ฟอร์ฟิคริกซ์ 3 ตัว (จากคู่มือซีเอฟซีเคมีและฟิสิกส์) มีค่าเท่ากับ 2.16, 7.21 และ 12.32 โมโนโซเดียมฟอสเฟตและฐานสังเครตของมันมักใช้โซเดียมฟอสเฟตในการสร้างบัฟเฟอร์ค่าความเป็นกรด - ด่างประมาณ 7 สำหรับการใช้งานทางชีวภาพดังที่แสดงไว้
ทำให้บัฟเฟอร์นี้หนักขึ้นเล็กน้อยกว่าการทำบัฟเฟอร์ TAE และ TBE ไม่ใช่เรื่องยากมากนัก เฉลี่ยเพียง ควรใช้เวลาประมาณ 10 นาทีเพื่อกระตุ้นบัฟเฟอร์นี้ นี่เป็นวิธีการ
1. พิจารณาคุณสมบัติบัฟเฟอร์
ก่อนที่จะทำการบัฟเฟอร์คุณควรทราบก่อนว่าคุณต้องการให้เป็นโมลาริตี้ปริมาณอะไรบ้างที่ต้องการและค่า pH ที่ต้องการคืออะไร บัฟเฟอร์ส่วนใหญ่ทำงานได้ดีที่สุดที่ความเข้มข้นระหว่าง 0.1 M ถึง 10 M ค่า pH ควรอยู่ในหน่วย pH 1 หน่วยของกรด / conjugate base pKa เพื่อความเรียบง่ายการคำนวณตัวอย่างนี้จะใช้สำหรับบัฟเฟอร์ 1 ลิตร
2. กำหนดอัตราส่วนของกรดกับฐาน
ใช้สมการ Henderson-Hasselbalch (ด้านล่าง) เพื่อหาอัตราส่วนของกรดกับเบสในการสร้างบัฟเฟอร์ของค่า pH ที่ต้องการ ใช้ค่า pKa ใกล้กับค่า pH ที่ต้องการและอัตราส่วนนี้จะอ้างอิงถึงคู่ conjugate ของกรด - เบสที่สอดคล้องกับ pKa นั้น
HH สมการ: pH = pKa + log ([Base] / [Acid])
สำหรับบัฟเฟอร์ของ pH 6.9 [Base] / [Acid] = 0.4898
แทน [Acid] และแก้ไข [Base]
ความเป็นโมฆะที่ต้องการของบัฟเฟอร์คือผลรวมของ [Acid] + [Base]
สำหรับบัฟเฟอร์ 1 M [Base] + [Acid] = 1 และ [Base] = 1 - [Acid]
โดยการแทนสมการอัตราส่วนนี้ในขั้นตอนที่ 2 คุณจะได้รับ:
[Acid] = 0.6712 โมล / ลิตร
แก้ปัญหาให้กับ [Acid]
ใช้สมการ: [Base] = 1 - [Acid] คุณสามารถคำนวณได้ว่า:
[ฐาน] = 0.3288 โมล / ลิตร
3. ผสมฐานกรดและคอนจูเกต
หลังจากที่คุณใช้สมการ Henderson-Hasselbalch เพื่อหาอัตราส่วนของกรดกับเบสในบัฟเฟอร์ของคุณให้เตรียมสารละลายเพียง 1 ลิตรโดยใช้ปริมาณ monosodium phosphate และ disodium phosphate ที่ถูกต้อง
4. ตรวจสอบ pH
ใช้หัววัด pH เพื่อยืนยันว่าได้รับ pH ที่ถูกต้องสำหรับบัฟเฟอร์ ปรับเล็กน้อยเมื่อจำเป็นโดยใช้กรดฟอสฟอรัสหรือโซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH)
5. แก้ไขโวลุ่ม
เมื่อได้ค่า pH ที่ต้องการแล้วนำปริมาตรของบัฟเฟอร์ไปเป็น 1 ลิตร จากนั้นเจือจางบัฟเฟอร์ตามต้องการ บัฟเฟอร์เดียวกันนี้สามารถเจือจางเพื่อสร้างบัฟเฟอร์ 0.5 M, 0.1 M, 0.05 M หรืออะไรก็ได้ระหว่าง
6. คำแนะนำสำหรับบัฟเฟอร์
โปรดจำไว้ว่า pKa ไม่สามารถวัดค่าได้อย่างง่ายดาย ค่าที่แตกต่างกันเล็กน้อยอาจมีอยู่ในวรรณคดีจากแหล่งต่างๆ
7. สิ่งที่คุณต้องการ
ในการทำบัฟเฟอร์คุณต้องใช้สาร 3 ชนิดในขณะที่วัสดุเหลือใช้เป็นอุปกรณ์ สารเหล่านี้ ได้แก่ โซเดียมฟอสเฟตโซเดียมฟอสเฟตและกรดฟอสฟอรัสหรือโซเดียมไฮดรอกไซด์เพื่อปรับ pH
นอกจากนี้คุณยังต้องมีเครื่องวัดค่า pH และสอบสวนและอุปกรณ์ที่เหมาะสม ซึ่งรวมถึงขวดปริมาตรกระบอกสูบกระบอกสูบ beakers และบาร์กวน
สุดท้ายคุณต้องมีเตาร้อน