วิธีการทำบัฟเฟอร์ TBE ใน 3 ขั้นตอนง่ายๆ

บัฟเฟอร์นี้ถูกนำมาใช้สำหรับการแยก DNA ของ electrophoresis

บัฟเฟอร์ TBE เป็นสารละลายบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วยฐาน Tris, กรดบอริกและ EDTA (หรือ Tris-borate-EDTA) บัฟเฟอร์นี้มักจะใช้สำหรับการวิเคราะห์ผลึก DNA ของผลิตภัณฑ์ agarose gel electrophoresis ซึ่งเป็นผลมาจากการขยาย PCR โปรโตคอลการทำให้บริสุทธิ์ของ ดีเอ็นเอ หรือ การ ทดลองการ โคลนนิ่งดีเอ็นเอ

TBE buffer เป็นประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการแยกชิ้นส่วนดีเอ็นเอขนาดเล็ก (MW <1000) เช่นผลิตภัณฑ์ย่อยของ เอนไซม์ที่มีข้อ จำกัด

TBE มีความสามารถในการเก็บบัฟเฟอร์มากขึ้นและจะให้ความละเอียดที่คมชัดกว่า บัฟเฟอร์ TAE บัฟเฟอร์ TAE เป็นสารละลายที่ประกอบด้วยฐาน Tris, กรดอะซิติกและ EDTA (Tris-acetate-EDTA)

TBE โดยทั่วไปมีราคาแพงกว่า TAE และยับยั้ง DNA ligase ซึ่งอาจก่อให้เกิดปัญหาหากมีการทำขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์และ ligation ตามลำดับ ด้วยขั้นตอนง่ายๆ 3 ขั้นตอนต่อไปนี้เรียนรู้วิธีสร้างบัฟเฟอร์ TBE ไม่ควรใช้เวลามากกว่า 30 นาทีในการสร้างบัฟเฟอร์นี้ นี่คือวิธี:

เตรียมโซลูชันสต็อคของ EDTA

ควรเตรียมสารละลาย EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) ก่อนเวลา EDTA จะไม่เข้าสู่สารละลายจน pH ถูกปรับประมาณ 8.0 สำหรับสารละลายสต็อก 0.5 มิลลิลิตร EDTA ที่มีปริมาตร 500 มิลลิลิตรให้ใช้ EDTA disodium salt 93.05 กรัม (FW = 372.2) แล้วละลายด้วยน้ำ deionized 400 มิลลิลิตรและปรับ pH ด้วย NaOH หลังจากนั้นให้เติมสารละลายที่ปริมาตรขั้นสุดท้าย 500 มิลลิลิตร

เตรียมโซลูชันสต็อคของ TBE

ทำเป็นสารละลาย TBE ที่เข้มข้น (5x) โดยการชั่งน้ำหนัก 54 g ฐาน Tris (FW = 121.14) และ 27.5 g boric acid (FW = 61.83) และละลายในน้ำ deionized ประมาณ 900 มิลลิลิตร จากนั้นเพิ่ม 20 มิลลิลิตร 0.5 M EDTA (pH 8.0) แล้วปรับสารละลายให้เป็นปริมาตรขั้นสุดท้าย 1 ลิตร

สารละลายนี้สามารถเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิห้อง แต่ตะกอนจะเกิดขึ้นในสารละลายที่เก่ากว่า เก็บบัฟเฟอร์ในขวดแก้วและทิ้งถ้าเกิดการตกตะกอน

เตรียมโซลูชันการทำงานของ TBE

สำหรับ agarose gel electrophoresis สามารถใช้บัฟเฟอร์ TBE ได้ที่ความเข้มข้น 0.5x (การสลายตัวของส่วนผสมเข้มข้น 1:10) เจือจางสารละลายสต็อกด้วยน้ำ deionized 10 เท่า ความเข้มข้นของตัวทำละลายขั้นสุดท้ายคือ 45 mM Tris-borate และ 1 mM EDTA ขณะนี้บัฟเฟอร์พร้อมสำหรับใช้ เจล agarose แล้ว

สิ่งที่คุณต้องการ

ในการทำบัฟเฟอร์ TBE คุณจำเป็นต้องมีสารเพียง 4 ชนิดเท่านั้น รายการที่เหลืออยู่ในรายการนี้คืออุปกรณ์ สารทั้ง 4 ชนิดนี้ ได้แก่ EDTA disodium salt, tris base, boric acid และ deionized water

สำหรับอุปกรณ์คุณจะต้องใช้เครื่องวัดค่า pH และมาตรฐานการปรับเทียบตามความเหมาะสม นอกจากนั้นคุณยังต้องใช้หัวเทียนและขวดขนาด 600 มิลลิลิตรและ 1500 มิลลิลิตร ปัดเศษออกความต้องการอุปกรณ์ของคุณจะจบการศึกษาถังและบาร์กวนและจาน

ตรวจสอบพื้นที่โฆษณาในห้องทดลองที่คุณจะใช้เพื่อให้แน่ใจว่าคุณมีทุกอย่างที่คุณต้องการก่อนที่จะเริ่มต้นใช้งาน ไม่มีอะไรที่เลวร้ายยิ่งกว่าการต้องหยุดกลางคันในการเตรียมโซลูชันเนื่องจากคุณใช้วัสดุที่ไม่เหมาะสม

ถ้าห้องทดลองของคุณอยู่ที่โรงเรียนหรือที่ทำงานของคุณให้ตรวจสอบกับบุคลากรที่เหมาะสมเพื่อดูว่ามีรายการทั้งหมดในคลังหรือไม่ การทำเช่นนั้นอาจช่วยให้คุณประหยัดเวลาและพลังงานในที่สุด