กิจกรรมเฉพาะและความสำคัญในการแยกโปรตีน

กิจกรรมเฉพาะคือคำที่ใช้ในการวัดอัตราการเกิดปฏิกิริยาของเอนไซม์กับสารตั้งต้น กิจกรรม เอนไซม์ เฉพาะ (กิจกรรมเฉพาะสำหรับสั้น) เป็นตัวชี้วัดความบริสุทธิ์ของเอนไซม์และอ้างเป็นหน่วย / มก . เนื่องจากปริมาณโปรตีน (มก.) มักจะน้อยกว่า แต่อัตราการเกิดปฏิกิริยายังคงเหมือนเดิม (หรืออาจเพิ่มขึ้นเนื่องจากการลดการแทรกแซงหรือการกำจัดสารยับยั้ง)

วัดจลนศาสตร์ของเอนไซม์

เอนไซม์ เป็นโปรตีนที่ทำหน้าที่เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาในการลดปริมาณพลังงานกระตุ้นสำหรับปฏิกิริยาที่จะเกิดขึ้น พลังงานกระตุ้นเป็นพลังงานที่จำเป็นในการเกิดปฏิกิริยา "เริ่มต้น" เนื่องจากปฏิกิริยาจำนวนมากไม่เกิดขึ้นอย่างรวดเร็ว (หรือเกิดขึ้นได้ทั้งหมด) หากมีความเป็นไปได้ทางอุณหพลศาสตร์

เอนไซม์เร่งปฏิกิริยาเฉพาะในเว็บไซต์เฉพาะ (เรียกว่าไซต์ที่ใช้งานอยู่) ซึ่งสารตัวทำปฏิกิริยานี้จะจับและทำปฏิกิริยาเพื่อสร้างผลิตภัณฑ์ พื้นผิวมีไซต์ที่ใช้งานอยู่เฉพาะเจาะจงเท่านั้นเพื่อไม่ให้สารอื่น ๆ รวมตัวหรือทำปฏิกิริยาในไซต์เดียวกัน เช่นเดียวกับล็อคและคีย์เอนไซม์แต่ละตัวจะกระตุ้นเฉพาะปฏิกิริยาเฉพาะ (มีข้อยกเว้นบางประการ)

กิจกรรมเฉพาะที่ใช้ในวิธีการแยกโปรตีนเพื่อระบุเปอร์เซ็นต์ของการทำให้บริสุทธิ์ เป็นสิ่งสำคัญที่ต้องทราบหน่วยนี้เมื่อซื้อเอนไซม์เพื่อระบุว่าเท่าใดของเอนไซม์บริสุทธิ์ที่คุณได้รับ

เมื่อวัดจลศาสตร์ของเอนไซม์ (อัตราการเกิดปฏิกิริยาของเอนไซม์กับพื้นผิวหรือพื้นผิว) กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงหมายถึงปริมาณของสารตั้งต้นที่เอนไซม์จะเปลี่ยนเป็นปฏิกิริยาต่อปฏิกิริยาต่อโปรตีนมก. ในการเตรียมเอนไซม์ต่อหน่วยของเวลา

ตัวอย่างของกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงจะเป็น:

• กิจกรรมเฉพาะของเอนไซม์ที่แยกได้วัดได้ที่ 150 umoles / min / mg โปรตีนก่อน การทำให้บริสุทธิ์ และ 800 umoles / min / mg หลังจากทำการฟอก

กิจกรรมเฉพาะเป็นตัววัดที่สำคัญของความบริสุทธิ์ของเอนไซม์ กระบวนการที่แตกต่างกันของเอนไซม์บริสุทธิ์ควรมีค่าเท่ากันและแม้แต่การเจือจางสารละลายเอนไซม์หลายครั้งก็จะมีค่ากิจกรรมที่เหมือนกันแม้ว่าจะมีค่ากิจกรรมเอนไซม์ที่แตกต่างกัน ทั้งนี้เนื่องจากในการคำนวณกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงตัวนับ (หน่วย / ml) และตัวหาร (mg / ml) จะได้รับผลกระทบอย่างเท่าเทียมกัน

กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงแตกต่างจากกิจกรรมมาก แต่การคำนวณกิจกรรมเฉพาะยังคงขึ้นอยู่กับค่ากิจกรรม ซึ่งหมายความว่าค่ากิจกรรมเฉพาะที่ระบุจะขึ้นอยู่กับข้อกำหนดของเอนไซม์

กลุ่มของเอนไซม์ที่มีค่ากิจกรรมจำเพาะต่ำกว่าที่คาดไว้อาจมีโมเลกุลของเอนไซม์ที่เปลี่ยนหรือผสมกับสิ่งสกปรก

ปัจจัยที่มีผลต่อเอนไซม์

อาจเป็นไปได้ว่าเอนไซม์ตัวหนึ่งอาจมีค่ากิจกรรมที่วัดได้แตกต่างกันเมื่อวัดในห้องทดลองที่แตกต่างกัน (นั่นคือความแตกต่างจริงในกิจกรรมที่วัดไม่เห็นความแตกต่างที่เกิดจากการใช้คำจำกัดความของหน่วยอื่น)

วิธีการทดสอบจะดำเนินการ (วิธีการทดสอบเพื่อตรวจสอบความบริสุทธิ์ของเอนไซม์) จะมีผลต่อค่ากิจกรรมที่รายงาน ตัวอย่างเช่นเอนไซม์มักใช้งานได้ดีระหว่างอุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเมื่อเทียบกับที่ 20 องศาเซลเซียสดังนั้นหากทำการทดสอบที่ 21 องศาเซลเซียสค่าจะแตกต่างจากการทดสอบที่อุณหภูมิ 32 องศาเซลเซียส (โดยทั่วไป , การทดสอบจะดำเนินการที่อุณหภูมิระหว่าง 20-37 องศาเซลเซียส)

ดังนั้นความหมายของเอนไซม์ยูนิทจะแสดงออกได้ดียิ่งขึ้นเนื่องจาก 1 หน่วย (U) คือปริมาณของเอนไซม์ที่กระตุ้นการเกิดปฏิกิริยาของสารตั้งต้น 1 นาโนเมตรต่อนาทีภายใต้สภาวะมาตรฐาน